大肠杆菌都有质粒吗？
一般的话，存在自然界的大肠杆菌自身都带有质粒，质粒编码非细菌生命所必须的某些生物学性状，如性菌毛、细菌素、毒素和耐药性等。质粒具有可自主复制、传给子代、也可丢失及在细菌之间转移等特性，与细菌的遗传变异有关。但是大肠杆菌工程菌自身不带质粒。大肠杆菌中存在质粒不一定都具有抗性基因，但有抗性的大肠杆菌一般都与其具有质粒有关。
提取大肠杆菌DNA为什么不直接提取细胞核中进行提取的DNA而要从细胞质的质粒中提取?
大肠杆菌没有细胞核
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。 大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
基因工程上 大肠杆菌质粒DNA是环状的，这样有利于外源目的基因的结合 ，因为环状质粒DNA被限制性内切酶剪切后的黏性末端可以和外源目的基因的结合牢固，并形成和原来结构相似的环状质粒DNA，保持了原来质粒的各种性能
许多大肠杆菌的质粒上含有lacz基因
31．（8分）许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ’基因，其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如下图。请据图回答：
(1)基因工程中，构建基因表达载体的目的是 ▲ 。
(2)限制酶EcoRI的识别序列和切点 是-G ’AATTC-，Sma I的识别序列和切点是-CCC’GGG-。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是 ▲ ，连接过程中需要的基本工具是 ▲ 。
(3)转化过程中，大肠杆菌应先用 ▲ 处理，使其处于能吸收周围 DNA的状态。
(4)菌落颜色为白色的是 ▲ ，原因是 ▲ 。
(5)菌落③中的目的基因是否能表达，可采用的检测办法是 ▲ 。
【答案】
31.（8分）（除标明的外，其余每空1分）
(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用（2分）
(2) -TTAA DNA连接酶
(3)Ca2+
(4)菌落③
lacZ’标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出3-半乳糖苷酶，故菌落为白色 (5)抗原一抗体杂交 。
请采纳~
【高中生物】如题，这四种大肠杆菌含有的基因有什么区别？如何判断得出？
LZ您好.
4种大肠杆菌分别是:
未被转化的,也就是说质粒根本没进去.
含有环状目的基因的,限制酶将目的基因所在的环一分为二,然后2个目的基因首尾相接构成一环.这些大肠杆菌拥有目的基因,但没有Amp'
含有质粒载体,那么就是说2个质粒的粘性末端结合在了一起,这个质粒里面没有目的基因,但有Amp'
最后是正确插入目的基因的重组载体,这个菌体里有Amp'也有目的基因
其中第一种仍然占绝大多数,第二种占的百分数很少.第三种也是不要的,第四种是要的.
Amp'是氨苄青霉素抗性基因,也就是说第三种和第四种放置于氨苄青霉素环境中无碍,而前两种会死.用这个方法能大幅上升培养基上我们要的大肠杆菌数目的百分比,然后再进行下一步操作!
制备感受态的大肠杆菌只是一个空壳？里面没有质粒那些？是这样吗？
不是这样的。感受态是指大肠杆菌的细胞膜处于容易吸收外源DNA的状态。大肠杆菌本身的遗传物质DNA还在细胞中，不能是一个空壳。否则，大肠杆菌自身将因为缺乏自己的遗传物质无法繁殖而死亡。后来吸收的重组质粒带有目的基因，但是缺乏大肠杆菌生长繁殖所必须的基因。如果大肠杆菌自己的DNA丢失，就无法分裂繁殖，人工导入的质粒DNA也不会得到表达，就失去了意义。总之，大肠杆菌自身的DNA必须要存在。
提质粒时，基因组为什么不会同时被提出来？
碱法提质粒时，溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白这沉淀的本质。最容易产生的误解是，当SDS碰到酸后发生的沉淀。如果你这样怀疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。大量沉淀的出现，显然与SDS的加入有关系。如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变*沉淀出来的蛋白质。既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。 但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate,PDS），而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶*的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合
50－100 kb大小的片断，没有办法再被PDS共沉淀了。所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
一句话,长长的基因组DNA在加入溶液三后被PDS共沉淀了,而我们在这一步后的高速离心后去掉了沉淀,也就去除了基因组DNA.
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质粒转化大肠杆菌的目的？
质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)。许多细菌除了拟核中的DNA外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)（补充：部分质粒为RNA）。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进真菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制！
通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，不断的复制，来得到目的产物。这就是转化的目的。
大肠杆菌的转化原理及方法
大肠杆菌的转化原理及方法
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
实验方法原理：质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
实验步骤
一、实验材料准备
1. 器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5 ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2. 试剂
培养基（不加抗菌素），LB培养基（加抗菌素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。
3. 材料处理
无菌ddH2O，1.5 ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100 μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100 ng），轻轻震荡后放置冰上20 min。
4. 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5 min。
5. 在超净工作台中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8. 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9. 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。
10. 观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
注意事项
1. 玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。
大肠杆菌里面有质粒吗?
质粒，英文为plasmid，性质：原指一切独立于染色体外的遗传因子，但目前一般指微生物细胞中的染色体外遗传因子。它们是能自主复制的共价、闭合、环状的DNA分子，整个质粒通常编码若干个基因。由于质粒的存在往往可以使宿主细胞具有某些性状，而质粒的丢失并不影响宿主在正常条件下的生存。由质粒授予宿主的表型有抗生素耐药性的、产抗生素的、降解芳香族化合物的、产溶血素的、糖发酵的、对重金属耐受性的、产杆菌素的、植物肿瘤诱发的和产硫化氢的。根据质粒的复制类型分为松弛型复制(胞内维持高拷贝数，从几个到几十个)和严聚紧型复制(胞内仅1～3个拷贝)。一部分质粒可通过细菌细胞的接触而转移，使一些对药物敏感的细胞获得对某些药物、金属离子的耐受性或使受体细胞获得另一些特性。在基因重组技术中，有些质粒可用作基因载体。现在应用的载体基本上是在质粒的基础上改造而成的。
大肠杆菌正是因为其具备有质粒，且已表达，所以才是现在最重要的基因工程菌。
另外更专业的说不能称大肠杆菌，而是大肠埃希氏杆菌，E.coli，因为大肠杆菌在食品检测中指的是一类菌，它本身不是一个分类学名称。
请问作为质粒等这些运载体的宿主，除了大肠杆菌可以作为宿主外，还有别的什么可以作为宿主吗？
质粒能以什么菌作为宿主，主要跟质粒上有个复制起始位点有关。不同的复制起始位点只能被特定的菌识别。一般来说一个质粒只能以一种菌做宿主，当然，这个菌不一定是大肠杆菌，绝大多数菌，比如芽孢杆菌、农杆菌、酵母菌等都可以有自己的质粒。有的质粒有两个或以上的复制起始位点，就可以在多种菌中传代，这种质粒往往叫做穿梭质粒。有的质粒的复制起始位点可以被多种不同的菌识别，这种质粒叫做广宿主质粒。
