swiss 3T3细胞是什么细胞
同样，是因为鼠纤维原细胞每3（第一个“3”）天传代（transfer-“T”）一次。此外，这些细胞的接触抑制作用很弱，分别称为3T6和3T123T3细胞 3T3 cell 指G．J．Todaro等从Swiss系小鼠胎儿里得到的细胞株，有来自Balb/，并进行连续培养的方法而建立的。由于它显示出强烈的接触抑制作用。3T3这一名称便由此而得，在与3T3同一类的细胞中，所以能明确地识别已发生转化的细胞。这一细胞系是将3 x 10*5 细胞（第二个“3”）接种在底部面积为20平方厘米的培养皿上，并作为一种重要的细胞材料使用于由肿瘤病毒和致癌剂等所引起的体外致癌研究，由6×10*5细胞或12×10*5细胞进行接种而得的细胞株;C系小鼠的Balb 3T3细胞
培养原代细胞的时候为什么要用3t3细胞
nih3t3细胞系保留接触抑制,无异体接种致癌性,无限繁殖细胞系是传代培养的细胞 和生物体内的正常细胞不一样所以nih3t3细胞系不算正常细胞生物体内的细胞直接培养 称为原代培养原代培养一般在20代左右会发生一次大规模细胞死亡挺过来的细胞就是传代培养的细胞系 一般会有性状的改变比如有的会获得永生...有的发生癌变 ... 至于具体细节 还是自己找找吧
nih/3t3细胞是低糖还是高糖培养
nih3t3细胞系保留接触抑制,无异体接种致癌性,无限繁殖细胞系是传代培养的细胞 和生物体内的正常细胞不一样所以nih3t3细胞系不算正常细胞生物体内的细胞直接培养 称为原代培养原代培养一般在20代左右会发生一次大规模细胞死亡挺过来的细胞就是传代培养的细胞系 一般会有性状的改变比如有的会获得永生...有的发生癌变 ... 至于具体细节 还是自己找找吧
怎么把带egfp的的细胞分选出来
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。
小鼠成纤维细胞nih3t3适合做转染吗
是可以选择做转染的。分享一下RFECT转染的步骤：A. 细胞接种: 1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
什么是细胞系，nih3t3细胞系是正常细胞但为什么能无限繁殖
nih3t3细胞系保留接触抑制,无异体接种致癌性,无限繁殖
细胞系是传代培养的细胞 和生物体内的正常细胞不一样
所以nih3t3细胞系不算正常细胞
生物体内的细胞直接培养 称为原代培养
原代培养一般在20代左右会发生一次大规模细胞死亡
挺过来的细胞就是传代培养的细胞系 一般会有性状的改变
比如有的会获得永生...有的发生癌变 ...
至于具体细节 还是自己找找吧
为什么原代培养的细胞难转染？适合原代细胞转染的方法有哪些？
对原代培养的细胞，可以采用一下方法：
非病毒载体，选择比较好的转染试剂，推荐QIAGEN的superfect转染试剂，对原代细胞还可以。
采用电转。理论上任何细胞都可以通过电转，不足之处：需要电转仪器，缓冲液非常有讲究，不同细胞条件要自己摸索，细胞电转后，状态很不好。
DEAE-葡聚糖：这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子，使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克，也可能是细胞内吞作用使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染，可重复性好，转染时要除掉血清。
磷酸钙共沉淀转染：最早在1973年开始采用。氯化钙+DNA+磷酸缓冲液按一定的比例混和，形成极小的磷酸钙-DNA复合物沉淀黏附在细胞膜表面，借助内吞作用进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要，pH值、钙离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间、细胞孵育时间乃至各组分加入顺序和混合的方式都可能对结果产生影响，重复性不佳。此法较易得到稳定转染，但转染原代细胞比较困难。
电穿孔法：通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡率高。每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。
脂质体法：中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质体细胞毒性相对较高，对不同的细胞可能会干扰细胞的代谢。
非脂质体的脂质：新一代的脂质体技术，其与DNA结合形成胶束结构而非简单的双层膜结构，使DNA的传递更有效且细胞毒性明显降低。
活化的树状聚合物：该聚合物的高度树状分枝形成球形结构，借助每个球体无数活化的氨基末端凝聚在DNA上形成较为致密的结构，并吸附在细胞膜上，经内吞进入细胞。活化的氨基可以调节胞内溶酶体pH值，抑制降解活性，使DNA稳定存在。转染效率高，毒性低，可重复性好。血清的存在能显著提高转染效率。
病毒介导的感染：感染需要将目的基因克隆到特定的病毒体系中，经过包装细胞的包装得到改造后的病毒，再进行感染。优点是转染效率特别高，尤其是难以转染的原代细胞、活体细胞。
