蛋白质印迹法为什么叫Westernblot法？
一开始的时候是叫Southern blot的，后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个针对蛋白质，这两种技术分别被称为Northern和Western，才最终确定下来叫Westernblot法。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。（如：伯乐生命的印迹膜上总蛋白检测）。希望采纳
[create_time]2014-11-06 08:40:12[/create_time]2014-11-06 14:05:15[finished_time]1[reply_count]2[alue_good]犁方祎030[uname]https://himg.bdimg.com/sys/portrait/item/wise.1.acc1f0c.WAAG29O0GjT7WXH0YnDbpw.jpg?time=3606&tieba_portrait_time=3606[avatar]TA获得超过153个赞[slogan]这个人很懒，什么都没留下![intro]289[view_count]
蛋白质印记 与 ELISA有什么不同
蛋白质印迹法，Western blotting，也可以叫免疫印迹法，是一种分析和鉴定特定蛋白质的技术。即将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移至固相膜上，再用标记的抗体或二抗与之反应，以显示膜上特定的蛋白条带。
ELISA，酶联免疫吸附剂测定，基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
两者是不太一样的。 关于ELISA可以参考http://wenku.baidu.com/view/cad91f23482fb4daa58d4b86.html
[create_time]2018-04-22 16:43:19[/create_time]2010-12-31 22:08:50[finished_time]1[reply_count]6[alue_good]百度网友ab8d21984[uname]https://himg.bdimg.com/sys/portrait/item/wise.1.85dd940a.aEHDymnt2lMGbEAZZ8boOA.jpg?time=3015&tieba_portrait_time=3015[avatar]TA获得超过257个赞[slogan]这个人很懒，什么都没留下![intro]3157[view_count]
蛋白印迹法
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特于1981年所著的《分析生物化学》中首次被称为Western Blot。蛋白免疫印迹是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
[create_time]2022-11-07 22:57:14[/create_time]2022-11-17 14:14:47[finished_time]1[reply_count]0[alue_good]帐号已注销[uname]https://himg.bdimg.com/sys/portrait/item/wise.1.1cd68e7a.izyaJAUlLwd907dsUt6tqg.jpg?time=2931&tieba_portrait_time=2931[avatar]TA获得超过708个赞[slogan]对榨取别人的剩余价值，资本家从来不会手软[intro]314[view_count]western blot原理是什么？
Western blot的原理：简单来说原理就是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。Western blot，中文为蛋白质免疫印迹试验，简单来说是抗原抗体特异性结合。Western blot结果中背景较高的原因及建议：膜封闭不够—延长封闭的时间；选择更加适合的封闭液。一抗稀释度不适宜—对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。一抗孵育的温度偏高—建议4℃结合过夜。膜在实验过程中干过—实验过程中要注意保持膜的湿润。检测时曝光时间过长—减少曝光时间。
[create_time]2022-01-05 16:40:21[/create_time]2022-01-07 16:50:41[finished_time]1[reply_count]2[alue_good]果果就是爱生活[uname]https://iknow-pic.cdn.bcebos.com/b21c8701a18b87d60ae1488e150828381e30fd84?x-bce-process%3Dimage%2Fresize%2Cm_lfit%2Cw_450%2Ch_600%2Climit_1%2Fquality%2Cq_85[avatar]专注生活教育知识分享[slogan]专注生活教育知识分享[intro]3561[view_count]western blot原理是什么？
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。相关如下原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。
[create_time]2021-11-05 13:53:20[/create_time]2021-11-14 12:39:43[finished_time]1[reply_count]0[alue_good]清风聊生活[uname]https://himg.bdimg.com/sys/portrait/item/wise.1.fc8e7220.P-GLmu_nCCSK4gcLMQukig.jpg?time=725&tieba_portrait_time=725[avatar]醉心答题，欢迎关注[slogan]这个人很懒，什么都没留下![intro]4530[view_count]为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白
为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白
PCR有两种解释：
1，最常用的理解：RT 是‘逆转录’（reverse transcription）的缩写
2，现在也有人这么用：RT是‘实时’（real time）的缩写
1，先说逆转录PCR：
这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒，是一种能按照碱基互补配对原则，以脱氧核糖核苷酸为底物，以寡居dT为引物，把mRNA转换成相应DNA的酶，由于该酶的效果与中心法则（DNA所承载的生物信息表达顺序应该是DNA-RNA-蛋白）顺序相反，故而有'逆转录'之称。
由于逆转录反应使用了引物和模板，也是聚合酶链式扩增的（PCR是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写）故称为RT-PCR。
再说其用途：
我们提取的RNA主要是rRNA，即核糖体RNA，但很少有人用它做些什么，倒是含量较少的mRNA，即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站，所以我们要把微量的信使RNA搞出来，更重要的是，RNA太容易分解了，环境中无处不在的RNA酶啊，以及其容易被水解的特点啊，让你不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式，于是就有了RT-PCR。
2， 再说实时PCR
细胞瞬时转录的mRNA种类颇多，各种mRNA含量也有实时的改变，这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化，realtime-PCR，以及quantitative realtime-PCR （简称qRT-PCR）就应运而生。
原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。经过一个PCR循环，可以把一个模板变成两个，在经过一个循环，就会变成四个，以此类推。如果PCR的检测线是1000个产物，那么当你的初始样品中模板是n个，那就需要经历的循环数为
的时候才能检测，这就把循环数与初始样品中模板数联系起来了。也就是说经过计算，达到检测限的循环数就能反映初始RNA样品中某种RNA的含量多少。
在实际中，使用了特殊的含有荧光剂的引物，光学检测相应光强度的产物所需的循环数，能高度灵敏的达到目的。
realtime-PCR有两种。绝对定量和相对定量。
绝对定量常用于逆转录病毒侵染细胞的检测，比如你想知道有多少HIV侵染了样本中的T细胞，你可以收集一定数量的T细胞并提取RNA，通过逆转录，以及taq酶利用HIV的特异引物进行扩增，最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染。
相对定量常用于检测实时的转录谱，例如在给药前后，某重要基因转录的实时变化，可以分别收取给药前后的全RNA，用相对转录量不变的基因为内参，如GAPDH或beta-actin，与目标基因转录的转录量对比，来定量反应药物对目的基因转录含量的影响。
[create_time]2016-12-18 23:44:11[/create_time]2017-01-02 15:45:09[finished_time]1[reply_count]0[alue_good]匿名用户[uname]https://iknow-base.cdn.bcebos.com/yt/bdsp/icon/anonymous.png?x-bce-process=image/quality,q_80[avatar][slogan]这个人很懒，什么都没留下![intro]1015[view_count]
