核酸提取或纯化技术主要有哪几类
核酸提取或纯化技术主要有三类:1、传统方法(操作复杂,耗时长)2、离心柱法(试剂盒)3、磁珠法(可单独采购磁珠或买成品试剂盒)其中,磁珠法可实现自动化操作,是目前比较主流的方法。核酸提取应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。扩展资料:核酸提取的注意事项:1、仪器的安装环境:正常的大气压(海拔高度应该低于3000m)、温度20-35℃、典型使用温度25℃、相对湿度10%-80%、畅通流入的空气为35℃或以下。2、避免将仪器放置在靠近热源的地方,如电暖炉;同时为防止电子元件的短路,应避免水或者其他液体溅入其中。3、进风口和排风口均位于仪器背面,同时避免灰尘或纤维在进风口聚集,保持风道的畅通。4、核酸提取仪离其他竖直面至少10cm。5、仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。6、远离带电电路:操作人员不得擅自拆解仪器,更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成,不要在接通电源的情况下更换元件。
核酸提取仪的主要步骤及方法
1. 环境温度:5℃~40℃;环境相对湿度;电压:50%~80%范围:100~240Vac,50/60 Hz。
2. 将仪器放在水平实验台上。
3. 放置仪器时应保证仪器周围10cm内无障碍物;多台仪器同时使用时,每台仪器之间的距离应不小于50cm。
4. 仪器主机通电之前,必须先用六角扳手取下磁棒架固定螺丝,否则通电运行将会损坏仪器。
5. 96孔板和磁力棒套的安装必须与对应的卡槽完全契合。
6. 请勿将该仪器安放在过度潮湿、高温或阳光直射等温度变化剧烈的区域,这可能会影响仪器的性能。
7. 请勿和其它大功率器件如离心机、空调等共用同一电源插座以免电源电压波动影响系统运行。
8. 请将适配器连接到仪器,把适配器与电源插座相连,并打开仪器开关。
9. 请勿在有潜在有害液体或气体的环境中操作该仪器。
10. 本仪器详细操作步骤,请参阅以下的说明。
1.5注意事项
1. 仪器应放在湿度低、灰尘少并远离水源的地方,室内应通风良好,仪器后方勿紧靠墙壁或堆放其他物品,以免影响散热。
2. 实验运行过程中禁止直接关闭电源开关。如果需要提前停止实验,请先在触屏软件上点击停止运行并确认后再关闭电源。
3. 裂解孔、洗涤孔和洗脱孔的样本体积应在50μL-1000μL,避免体积过多,溢出孔位。
4. 机器运行及测试进行时,请勿触摸加热条,以免烫伤。
5. 紫外灯开启灭菌时,请勿直视紫外光。
6. 移动仪器之前,请先切断电源,再用螺钉固定磁棒架。
7. 仪器长期不使用时,请拔掉插头,并用软布或塑料袋覆盖仪器,以防止灰尘进入。
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BioG全自动核酸提取仪
在核酸的分离提取和纯化过程中,都利用核酸的哪些生物学特性?
核酸(nucleic acid)是遗传信息的携带者,是基因表达的物质基础。无论是进行核酸结构还是功能研究,首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。核酸分离、纯化原则:1.保持核酸分子一级结构的完整性。因为遗传信息全部储存在一级结构之中,核酸的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。2.分离核酸原则:1)温度不要过高;2)控制pH值范围(pH值5-9); 3)保持一定离子强度; 4)减少物理因素对核酸的机械剪切力.
在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键,破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌,提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。
常用的DNA酶抑制剂有1.金属离子螯合剂:如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)、8-羟基喹啉。2.阴离于型表面活性剂如SDS,该试剂除对核酸酶有抑制作用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物,该复合物在高盐溶液中沉淀。
常用的RNA酶(RNAase)抑制剂有:1.皂土(bentonite )作用机制:皂土带负电荷,能吸附RNase,使其失活。2. DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液体,很强的核酸酶抑制剂。作用机制:与蛋白质中His结合使蛋白变性。
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