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1992年因参演长春电影制片厂出品、乔克吉执导的剧情片《无使命行年动》，而为大众所知。1993参演由袁和平执导、叶广俭编剧、李连杰等主演的动作电影《太极张三丰》。同年在元奎执导，李连杰、李嘉欣等主演的动作电影《方世玉》中饰演余童。同年出演由洪金宝执导，狄龙、杨凡等主演的武侠剧情片《神州第一刀》，饰演步亭。
1994年在杨洁执导的历史古装剧《西施》中饰演王孙雄。
1996年出演张华勋执导的古装历史电视剧《隋唐演义》。
2010年参与拍摄由鞠觉亮执导的大型古装电视剧《新水浒传》，饰演美髯公朱仝[1]。
2012年与王挺、崔波、刘佩琦等共同主演由导演游达志和编剧刘奎序联手打造《我的传奇老婆》，在剧中一人分饰两角[2]。同年担纲古装动作电影《水浒英雄谱》之《金大坚与萧让》的男一号金大坚[1]。同年与陈键锋、元彪、陶欣然共同主演由游达志执导的年代动作剧《十二金钱镖》。
2013年在郑嘉颖、韩雪等主演的电视剧《叶问》中饰演撸大哥。
2014年在尚敬执导、范伟和毛孩主演的电视剧《小宝和老财》中饰演日军军官劈谷[3]。12月6日，参演的电视剧《虎口拔牙》在中国大陆首播。[19]
2015年出演由张峰执导、何润东和张俪联袂主演的年代传奇大剧《玄武》。同年出演由郑嘉颖、唐艺昕、林佑威等主演的民国传奇大剧《太极宗师之太极门》[4]。
2016年参演网剧《老炮儿》。同年参演由蒋龙、代文雯等携手罗家英、崔成国等演员出演的穿越武侠网剧《大侠日天》，在剧中饰演高人刘尘风[5]。同年与孙浩、郑伊涵等共同主演刘德甫执导电影《北纬十八度爱情》[6]。同年与骆达华、王建新等主演黄建业执导动作电影《狼回头》。同年参与拍摄的古装电视剧《武神赵子龙》开播，在剧中饰演文丑[7]。同年出席电视连续剧《陈炉古镇》在浙江湖州举行的剧组转场暨特约演员海选仪式[8]。
2017年与周卫涛共同主演由刘亚军执导、任舯泽担任制片人的系列电影《天罚》，饰演于局长。
2020年1月3日主演电影《聊斋之极道天师》上映。[11]7月参演惊悚悬疑黄庙村系列电影《黄庙村之谜棺美人》。[10]11月6日主演电影《赵云传之龙鸣长坂坡》上线。[13]12月1日参演的电视剧《大秦赋》定档在CCTV-8播出，在剧中饰演蒙骜。
2021年01月27日参演的电视剧《风起霓裳》在中国大陆上映。[14]3月9日，主演的电视剧《荣耀乒乓》在中国大陆首播。[9]8月20日，参演的电影《黄庙村·地宫美人》上映，在片中饰演多子伯。[18]
于彦凯凭借一身过硬的真功夫，曾经在电影《倚天屠龙记》中饰演大反派成昆、电影《方世玉》中饰演余童，在数十部动作电影中塑造了各种类型的银幕形象。自幼练就的武术功底，加之二十年的动作戏拍摄经验，令于彦凯对动作电影、武侠片有着独特情结。（新浪评）[1]
